一起來看看手性柱的使用方法與注意事項。手性柱就是用來分析或者是制備手性化合物的色譜柱,也同樣分正相和反相,然后根據(jù)填料不同可以分為環(huán)糊精手性柱、纖維素衍生物手性柱、配體交換手性柱等各種各樣的類型。下面就來看看它的使用方法與注意事項。
一、手性柱使用方法
1.、若RP-HPLC用到過緩沖液的話,先換成純水,按照C18柱的使用維護方法,將普通色譜柱洗好,然后在進行封柱。
2.、卸下常規(guī)反相C18柱后,直接用兩通代替色譜柱將兩部分管路連接起來,需用的2個通道都塞到水中,先用水洗干凈去帶走(可能用到的)緩沖液和乙腈(或者甲醇),然后同樣地用異丙醇洗去帶走水。最后再換上正相模式下的流動相(正己烷-異丙醇/乙醇)。
3、接上手性柱,要先預(yù)設(shè)定一個分離的條件,那就是平衡色譜柱,平衡好后才進樣分析,
二、手性柱的注意事項
1、樣品檢測前需仔細詢問送樣人員樣品中可能含有的溶劑,如果工藝中用到丙酮、氯仿、DMF、二甲基亞砜、乙酸乙酯、二氯甲烷、THF,則需盡量烘干。樣品盡量溶解在流動相中,并用μm濾膜過濾。切記不能用強堿性物質(zhì)作為流動相添加劑或溶解樣品,因為這樣子會損壞手性柱填料中的硅膠成分。
2、如果系統(tǒng)中或者色譜柱中含較高濃度的異丙醇或者乙醇時,由于他們的粘度比較大,在使用平衡色譜柱的時候需要特別注意壓力變化,可采用低流速平衡,當(dāng)柱壓下降后再逐漸升高至自己所需要的流速。
3、樣品檢測完畢,用100%無水2醇清洗色譜柱,以min沖洗3個小時。用100%無水乙醇柱壓會比較高,所以流速不能過高,沖洗過程中注意壓力變化,如果是超過50bar,則最好把流速降至min,并且可以適當(dāng)?shù)难娱L沖洗時間。
4、大多數(shù)手性毛細管柱的固定液是環(huán)糊精改性物。環(huán)糊精連上不同官能團就具備了不同的極性,要選擇柱子的話,先確定你要做的產(chǎn)物類型,然后選擇分離效果最好的環(huán)糊精固定液類型,
以上就是手性柱的使用方法與注意事項了,手性柱的使用方法也不止與這些,想要了解更多關(guān)于手性柱的資訊,歡迎致電研創(chuàng)生物進行咨詢。