在高效液相色譜(HPLC)分析中,目標(biāo)峰分離度不足是實(shí)驗(yàn)室常見(jiàn)的“頭疼問(wèn)題”。分離度差不僅影響數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性,還可能導(dǎo)致結(jié)果誤判!別擔(dān)心,本文總結(jié)了7大核心解決方案,從流動(dòng)相優(yōu)化到儀器維護(hù),手把手教你拯救重疊峰!
分離度(Resolution, Rs)是衡量色譜峰分離效果的核心指標(biāo),通常要求Rs≥1.5。當(dāng)Rs不足時(shí),可能是以下原因?qū)е拢?/p>
色譜柱性能下降(柱效低、填料污染)
流動(dòng)相選擇不當(dāng)(pH、有機(jī)相比例、添加劑不匹配)
方法參數(shù)不合理(流速、溫度、梯度程序)
樣品過(guò)載或基質(zhì)干擾
調(diào)整有機(jī)相比例:
增加乙腈/甲醇比例可縮短保留時(shí)間,反之延長(zhǎng)。通過(guò)微調(diào)比例(如±5%),拉開目標(biāo)峰與干擾峰的間距。
精準(zhǔn)控制pH值(針對(duì)可電離化合物):
酸性物質(zhì):降低pH抑制電離,增強(qiáng)保留;
堿性物質(zhì):升高pH促進(jìn)電離,改善分離。
巧用添加劑:
添加離子對(duì)試劑(如0.1%三氟乙酸)或緩沖鹽(如磷酸鹽),增強(qiáng)極性化合物分離。