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干貨 | HPLC峰型問題之拖尾峰的原因和解決方法

欄目:行業(yè)資訊 發(fā)布時間:2023-09-07
拖尾峰又叫后延峰,拖尾峰表現(xiàn)為前沿陡峭,后沿較前沿平緩的不對稱峰。
峰又叫峰,峰表現(xiàn)為前沿陡峭,后沿較前沿平緩的不對稱峰。

拖尾峰

拖尾峰原因及解決方法

拖尾峰主要由柱內(nèi)填料污染,色譜柱被堵塞,樣品濃度過高致使柱超載,柱外效應(yīng),硅醇基團作用等原因?qū)е隆P⊙醒埩藦V州研創(chuàng)的技術(shù)小哥為大家講解一下產(chǎn)生的原因以及解決的方法:



柱內(nèi)填料污染

  • 原因:流動相和樣品中的雜質(zhì)易造成色譜柱內(nèi)填料污染,導(dǎo)致拖尾峰出現(xiàn)。
  • 解決方法:
    1.流動相所用的各種溶劑至少是分析純,盡量使用色譜純試劑。
    2.流動相所用的水最好是超純水或全玻璃器皿雙蒸水。用前先用0.45um溶劑微孔過濾(器)過濾,除去可能存在的微粒。
    3.流動相建議現(xiàn)用現(xiàn)配,對于含鹽的溶液尤其注意長置會產(chǎn)生細菌或出現(xiàn)沉淀。此外還得保證儲存流動相的容器清潔。
    4.復(fù)雜樣品可選用0.45um溶劑微孔過濾(器)或樣品預(yù)處理柱對樣品進行預(yù)處理,確保樣品中不含微粒雜質(zhì)。若樣品不便處理,要使用保護柱。



色譜柱被堵塞

  • 原因:色譜柱的進出口的篩板堵塞,樣品進入色譜柱時會受阻,液體流動受阻形成延遲,使得樣品在相中停留時間變長,從而使峰型拖尾。

  • 解決方法:

    1.配置流動相時污染流動相使用色譜純?nèi)芤海F(xiàn)配現(xiàn)用,并通過4.5um濾膜過濾后方可使用。

    2.型號規(guī)格插口不匹配,在扭緊的時候造成形變而促使管道阻塞。色譜柱有物理損壞是會造成峰形拖尾。唯一的解決方法就是更換新柱。

    3.樣品存在雜質(zhì),導(dǎo)致堵塞在篩板處,過濾樣品

    4.應(yīng)用較高濃的緩存鹽溶液,在關(guān)機時將會在出入口端結(jié)晶體成塊并導(dǎo)致阻塞。

5.適當降低溫度,讓試劑溶解得慢一些。

6.如以上方法都不能解決堵塞問題,則需考慮換一根新的手性色譜柱。




樣品濃度過高致使柱超載

  • 原因:樣品在柱上超載能引起峰展寬,拖尾(或伸舌)。
  • 解決方法:適當減小進樣量或樣品濃度(需要時,可提高檢測器靈敏度)直至峰形和保留時間不再改變,便可消除這種不良影響。減小進樣量還能改善其分離度。正常情況下,樣品中每種化合物在150×4.6mm柱中進樣量保持在3~50ug范圍內(nèi),不會引起明顯超載。



柱外效應(yīng)

  • 原因:柱外效應(yīng)(即進樣閥、色譜柱及檢測器間的管路過長、直徑過粗、管路接頭不匹配、有死體積)是指色譜柱之外的造成色譜峰展寬的成因。
  • 解決方法:在可能的條件下,色譜柱要使用合理管長的管路,連接管內(nèi)徑盡可能窄小,切口務(wù)必平整光滑,同時流速需要合理不要過快,可采用色譜柱推薦的流速,以防止因樣品擴散造成不能反映色譜柱真實柱效等情況發(fā)生。



硅醇基團作用

  • 原因:仔細分析色譜柱內(nèi)填料表面性質(zhì)可知:反相色譜柱填料的表面大約被鍵合相覆蓋了一半,其余的就是未被鍵合的硅醇基團。所謂的保留是指樣品分子與鍵合相相互作用的結(jié)果。但是,酸性或堿性化合物與硅膠表面殘存的硅醇基團或金屬雜質(zhì)之間相互作用而引起雙重保留機理,因此,發(fā)生了峰形拖尾。
  • 解決方法:為了減小峰形拖尾,通??稍诹鲃酉嗉尤?5mM三乙胺(抑制劑)。三乙胺能與硅醇基團發(fā)生強烈的相互作用,從而降低或阻斷樣品分子與硅醇基團的作用,以保證保留機理正常進行,并大大緩解了峰形拖尾。建議使用長鏈的硅醇基抑制劑,雖起效較慢,但持續(xù)力較三乙胺長。因為抑制劑分子中除了胺基與硅醇基團發(fā)生極性作用外,大分子中非極性部分與固定相也會發(fā)生反相作用而產(chǎn)生保留現(xiàn)象。如果將抑制劑加至樣品中,效果會顯著。



柱內(nèi)金屬污染

  • 原因:柱內(nèi)金屬污染(Fe,Ni等)可引起峰形拖尾。金屬可由填料本身帶進,也可由腐蝕性流動相緩慢溶解柱進口的金屬濾片,隨流動相沉積到柱填料中。
  • 解決方法:若色譜柱內(nèi)填料被金屬污染后,造成酸/堿性樣品拖尾,可用/酸洗后再鍵合的填料。