色譜工作者經(jīng)常會遇到這樣的問題。什么時候換色譜柱？色譜柱的塔板數(shù)量能反映色譜柱的狀態(tài)嗎？確色譜柱應(yīng)該是“退休”標(biāo)準(zhǔn)，從經(jīng)驗來看，當(dāng)色譜柱的塔板數(shù)量降低到新柱的百分比時，可以認(rèn)為色譜柱不能再使用了？塔板數(shù)量是評價色譜柱質(zhì)量的唯一指標(biāo)嗎？如何判斷色譜柱不能再使用了？

塔板數(shù)量是一個粗略的指標(biāo)，不能作為評價色譜柱的標(biāo)準(zhǔn)。通常使用塔板數(shù)量來檢查色譜系統(tǒng)：將新柱連接到儀器上，并根據(jù)色譜柱制造商提供的測試條件對色譜柱進(jìn)行測試。你應(yīng)該得到和分析報告一樣的結(jié)果。最糟糕的是，塔板的數(shù)量應(yīng)該比報告值低10%。如果您測量的塔板數(shù)量遠(yuǎn)低于制造商提供的報告數(shù)據(jù)，則表明您的色譜系統(tǒng)可能存在一些問題。進(jìn)樣器、柱外效應(yīng)、毛細(xì)連接和易出現(xiàn)問題。

利用壓力、分辨率和峰形混合指標(biāo)來檢查色譜柱的狀態(tài)

相信每個色譜工作者都會關(guān)心分辨率。分辨率是檢查色譜柱分離特定樣品質(zhì)量的指標(biāo)。然而，另一個需要考慮的因素是，塔板數(shù)量對分辨率的影響只是平方根，這意味著當(dāng)色譜柱的塔板數(shù)量減少50%時，分辨率只減少7%。當(dāng)色譜柱塔板數(shù)量減少到新柱的一半時，肯定會出現(xiàn)其他更嚴(yán)重的癥狀，表明色譜柱的使用壽命不長。在實際工作中，大多數(shù)色譜方法只需要塔板數(shù)量的一半，這些色譜方法仍有優(yōu)化的空間?？梢钥闯觯V柱的塔板數(shù)量并不是分離中最重要的參數(shù)。更好的方法是使用壓力、分辨率和峰值混合指標(biāo)來檢查色譜柱的狀態(tài)。

（1）壓力測量：壓力測量是最簡單的，通常確定的色譜方法應(yīng)滿足以下要求：使用新柱時柱壓不高于2500psi，在任何情況下，壓力都不超過30000psi。雖然現(xiàn)代液相色譜系統(tǒng)可以在更高的壓力下使用，但高壓造成的系統(tǒng)損耗和泄漏問題將非常嚴(yán)重。當(dāng)壓力超過3000psi時，，需要考慮更換進(jìn)樣器和色譜柱之間的0.5mm孔徑的在線濾芯。如果更換濾芯后壓力仍然很高，色譜柱的濾芯或色譜柱就會被污染，這表明是時候更換柱子了。據(jù)統(tǒng)計，超過60%的色譜柱損壞是由高壓引起的。

（2）分辨率：分辨率是調(diào)查色譜柱的一個重要指標(biāo)。只要兩個組分能得到基線分離，分析物的定量就不會有問題。對于對稱的高斯峰，1.5的分辨率可以得到基線分離；若基線分離；Rs在1.7~2.0之間更好。如果峰尾嚴(yán)重，則需要更高的分辨率。將分辨率作為色譜柱評價指標(biāo)的優(yōu)點是可以直觀地看到相鄰峰的分離。

（3）峰形拖尾：調(diào)查色譜柱質(zhì)量的標(biāo)準(zhǔn)之一是峰形拖尾。制造商測試報告的峰形非常漂亮，但這并不意味著色譜柱分析了實際樣品。實際樣品中總是或多或少含有峰形拖尾的成分。值得一提的是，含有氮原子的化合物與硅膠骨架上的游離硅羥基緊密結(jié)合。色譜柱使用時間越長，鍵合相流失，拖尾越嚴(yán)重。但拖尾的變化不能像分辨率的變化那樣立即看到，因此最好設(shè)定拖尾因子的上限。例如，美國藥典規(guī)定拖尾因子不超過1.8。

確定色譜柱“退休”標(biāo)準(zhǔn)的最佳時間是在開發(fā)分析方法或進(jìn)行方法認(rèn)證時。通常在開發(fā)分析方法的過程中，會測試幾個色譜柱，分析足夠的實際樣品，從而知道分離變差時是什么樣的情況，一般在開始時傾向于使用廣泛的范圍。根據(jù)經(jīng)驗，如果在開始時收緊系統(tǒng)的適用性要求，則很難在方法認(rèn)證后放寬這一要求。在分析實際樣品之前，進(jìn)行系統(tǒng)適用性調(diào)查，以確保色譜法符合分析師可接受的標(biāo)準(zhǔn)