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色譜柱操作時常見的問題

欄目:行業(yè)資訊 發(fā)布時間:2022-05-06
在我們實驗室中色譜柱的使用一直是非常重要的,而色譜柱的使用需要一定的知識儲備,如果對于色譜柱的使用不了解的話,就很容易出現(xiàn)各種問題,影響實驗的進程,那么下面就來看看那色譜柱操作時常見的問題吧!

  在我們實驗室中色譜柱的使用一直是非常重要的,而色譜柱的使用需要一定的知識儲備,如果對于色譜柱的使用不了解的話,就很容易出現(xiàn)各種問題,影響實驗的進程,那么下面就來看看那色譜柱操作時常見的問題吧!


色譜柱

  1、裝柱

  柱子下面的活塞一定不要涂潤滑劑,會被淋洗劑帶到產(chǎn)品中的,可以采用四氟節(jié)門的。干法和濕法裝柱覺得沒什么區(qū)別,只要能把柱子裝實就行。裝完的柱子應該要適度的緊密(太密了淋洗劑走的太慢),一定要均勻(不然樣品就會從一側斜著下來)。

  書中寫的都是不能見到氣泡,我覺得在大多數(shù)情況下有些小氣泡沒太大的影響,一加壓氣泡就全下來了。當然如果你裝的柱子總是有氣泡就說明需要多練習了。但是柱子更忌諱的是開裂,甭管豎的還是橫的,都會影響分離效果,甚至作廢!

  2、加樣

  用少量的溶劑溶樣品加樣,加完后將下面的活塞打開,待溶劑層下降至石英砂面時,再加少量的低極性溶劑,然后,再打開活塞,如此兩三次,一般石英砂就基本是白色的了。加入淋洗劑,一開始不要加壓,等溶樣品的溶劑和樣品層有一段距離(2~100px就夠了),再加壓,這樣避免了溶劑(如,二氯甲烷等)夾帶樣品快速下行。

  3、淋洗劑的選擇

  感覺上要使所需點在Rf0.2~0.3左右的比較好。不要認為在板上爬高了分的比較開,過柱子就用那種極性,如果Rf在0.6,即使相差0.2也不容易在柱子上分開,因為柱子是一個多次爬板的狀態(tài)。